TurboTEV蛋白酶是一种包含烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段的增强型半胱氨酸蛋白酶。它能够识别并切割位于Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列之间的位点，主要在Gln和Gly之间进行切割。此酶是一种限制性蛋白酶，在4°C下展现出极强的活性，具有高特异性和卓越稳定性。TurboTEV蛋白酶的活性不依赖于特殊缓冲液，用户可以根据目标蛋白的最佳需求调整缓冲条件。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，配有GST和His标签，以便通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除结合的标签。其活性源于大肠杆菌，活性水平超过10单位/µg，1单位TurboTEV蛋白酶在30℃下能够在1小时内裂解3µg底物的85%。

实验步骤

1. 在溶液中裂解

A. 准备新鲜的冷透析缓冲液。例如：25mM Tris-HCl, pH 8.0, 150-500mM NaCl, 14mM β-巯基乙醇。

B. 将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL，必要时可选择不进行此步骤，并保留一小部分未切割样品以供分析。若目标蛋白样品是从镍柱洗脱下来的，并且能够与EDTA兼容，则可添加EDTA使其最终浓度达到0.5mM。

C. 按照蛋白酶与目标蛋白1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶。例如，100mg目标蛋白对应10000单位（1mg）的TurboTEV蛋白酶。

D. 在4°C下，用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶。

3. 进行SDS-PAGE分析（可选）。

产品应用

• 蛋白裂解功能；

• 从重组蛋白中去除融合标签；

• 纯化蛋白质和肽。

常见问题

1. 关于TEV消化反应的缓冲条件，这些条件是否对TurboTEV的切割效率产生影响？

答：a) 1mM的DTT可用；b) 不推荐使用10%的甘油；c) 不推荐20mM组氨酸；d) 使用500mM NaCl不建议；e) 不建议使用100mM Tris；f) β-巯基乙醇与DTT类似，可以添加。

2. 在剪切之前，是否需要进行缓冲液交换？

答：这可能是必要的。

参考文献

[1] Hyeok-Jin Ko et al. Functional Cell Surface Display and Controlled Secretion of Diverse Agarolytic Enzymes by Escherichia coli with a Novel Ligation-Independent Cloning Vector Based on the Autotransporter YfaL. Appl Environ Microbiol, May 2012; 78:3051-3058

[2] Jussi J Joensuu et al. Hydrophobin Fusions for High-Level Transient Protein Expression and Purification in Nicotiana benthamiana. Plant Physiology, Feb 2010; 152:622-633

（此处省略更多参考文献）

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